Metody identyfikacji wirusa HPV.

Na przestrzeni lat wprowadzono szereg metod identyfikacji HPV. Metody te różnią się czułością i specyficznością. Niektóre z nich stosuje się w praktyce klinicznej (np. kolposkopia, cytologia), inne (immunocytochemiczne, immunohistochemiczne, hybrydyzację DNA) w badaniach naukowych i w skryningu.

Metody identyfikacji HPV, ich zastosowanie i ograniczenia przedstawiono poniżej.

Metody identyfikacji wirusa HPV Ocena makroskopowa skóry lub innych tkanek Kolposkopia skóry lub błon śluzowych układu rozrodczego Ocena mikroskopowa preparatów histologicznych lub cytologicznych Odczyny immunohisto/cytochemiczne w preparatach histologicznych lub cytologicznych Badanie w mikroskopie elektronowym Hybrydyzacja DNA metodą PCR lub Hybrid Capture 2

Zakażenie HPV prowadzi do powstania egzofitycznych, brodawkowych uwypukleń nabłonka wielowarstwowego płaskiego (kłykcin), które można łatwo rozpoznać w ocenie makroskopowej. Zmiany najczęściej lokalizują się na skórze (zwykle dłoni) i w obrębie zewnętrznych narządów płciowych. Zmiany te są wysoce zakazne, ale jest to zakażenie samoograniczające się, które ulega spontanicznej regresji.

Koposkopia pozwala na wykrycie zakażenia bezobjawowego, które nie jest widoczne gołym okiem. Po przemyciu szyjki macicy roztworem kwasu octowego dokonuje się oceny makroskopowej szyjki macicy przy pomocy kolposkopu (mikroskopu przy pomocy, którego można uzyskac "trójwymiarowy obraz"). Obraz kolposkopowy może sprawiac trudności diagnostyczne, chyba, że obecne są zmiany o charakterze kłykcin.

W preparatach histologicznych stwierdza się koilocytozę, rogowacenie pojedynczych komórek, parakeratozę, akantozę i obecność komórek wielojądrowych.

Podobne zmiany stwierdza sie w preparatach cytologicznych. Badanie kolposkopowe, histologiczne, cytologiczne ani odczyny immunohisto-cytochemiczne nie pozwalają na identyfikację typu wirusa HPV, integracji HPV DNA z DNA gospodarza ani obecności zakażenia utajonego.

Badanie w mikroskopie elektronowym pozwala na identyfikację wirusa HPV w zeskrobinach z kłykcin, ale metoda ta jest rzadko stosowana, ponieważ zwykle liczba cząstek wirusa jest niewielka. Do tej pory nie opracowano metody hodowli wirusa HPV.

Z uwagi na ograniczenia przedstawionych powyżej metod, analiza molekularna HPV DNA jest metodą z wyboru do identyfikacji typów wirusa HPV. Badanie polega na zastosowaniu sond RNA, które hybrydyzują z DNA HPV, wykrywaniu hybryd RNA-DNA przez przeciwciała i wzmocnieniu sygnału przez system przeciwciał skoniugowanych z alkaliczną fosfatazą. Oznaczanie HPV metodami sond genetycznych Hybrid Capture 2 (Digene Diagnostics, Gaithersburg, MD, USA) jest uznanym przez Amerykańską Agencję żywności i Leków (American Food and Drug Agency, FDA) testem do diagnostyki molekularnej zakażeń HPV. Badanie to powinno być wykonywane jako badanie dodatkowe do badania cytologicznego szyjki macicy u kobiet 30-letnich i starszych.

 (For further  reading see  Denny LA and Wright TC in  Best Practice and Research in Clinical Obstetrics and  Gynaecology2005  vol 19,no4,pp501-505 Also available on line at http://www.sciencedirect.com ).